Le vaccin Genhevac B Pasteur a obtenu l'autorisation de mise sur le marché le 21 décembre 1987 (A.M.M.330503-6). Il est remboursé par la Sécurité Sociale à 65% et est sur la liste des spécialités pharmaceutiques agréées à l'usage des collectivités et divers services publics depuis le 8 mai 1988 Journal Officiel).
Le vaccin est une suspension inactivée d'antigène HBs produit sur lignée cellulaire CHO (cellules d'ovaires de hamster), purifié, contenant les protéines S et pré S, et adsorbé sur un gel d'hydroxyde d'aluminium La construction de la cellule recombinée se fait à partir d'un support cellulaire, la cellule d'ovaires de hamster chinois qui a l'avantage de permettre l'expression de protéines glycosylées directement excrétées sous forme particulaire dans le milieu de culture des cellules. Le vecteur qui va être intégré dans ces cellules est un plasmide comportant la séquence du gène antigène HBs ainsi que la séquence pré S qui sont des séquences vérifiées identiques aux séquences naturelles du VHB (60, 61, 62). Les protéines pré S2 comme nous l'avons déja vu favorisent l'immunogénicité contre le VHB ce qui est un atout pour ce type de vaccin par rapport aux vaccins plasmatiques (63).
Le vecteur plasmidique comporte aussi un gène codant pour la dihydrofolate réductase, enzyme utilisée comme marqueur de sélection. La cellule CHO dihydrofolate réductase négative devient dihydrofolate réductase (DHRF) positive quand le plasmide est inséré. La sélection des cellules DHRF positive se fait par traitement par méthotrexate à doses élevées, les cellules DFIRF négatives n'y résistant pas. Une série de contrôles tout au cours de la fabrication est effectuée afin de garantir la qualité du produit final.
Les étapes de fabrication ont été choisies pour leur efficacité dans l'élimination des impuretés apportées par le substrat cellulaire utisé comme les protéines, l'ADN cellulaire, les rétrovirus pouvant être présents dans la cellule CHO ainsi que celles apportées par le milieu de culture (sérum de veau). Les protéines obtenues sur milieu de cultures synthétisées par les cellules CHO DFIRF positives sont fitrées et concentrées puis fractionnées par le polyéthylène-glycol ce qui permet l'élimination des protéines et des particules rétrovirales.
Puis le substrat est centrifugé par centrifugation zonale de vélocité sur gradient de saccharose ce qui permet d'éliminer par leur taille les protéines sériques et les rétrovirus de coefficients de sédimentation élevés. Le substrat est centrifugé à nouveau par centrifugation isopycnique sur gradient de bromure de potassium ce qui permet d'éliminer l'ADN cellulaire et les protéines sériques de densité plus élevées. Le substrat par chromatographie par échange d'ions est purifié avec élimination de l'ADN résiduel et de l'albumine bovine du milieu de culture. Enfin la suspension d'antigènes HBs purifiée bénéficie d'un traitement par la chaleur et le formol inactivant les différentes classes de virus susceptibles d'être encore présentes dans la suspension.
Toutes ces étapes aboutissent à une suspension d'antigènes HBs extrêmement pure conforme aux normes recommandées par l'OMS. En effet le taux résiduel dADN cellulaire est toujours très inférieur au taux résiduel recommandé par l'OMS ( < à 100 pg/ dose humaine); le résidu en ADN cellulaire est inférieur à 1 pg par dose. De même l'activité transcriptase reverse est toujours négative sur le produit purifié (64, 65).
1 dose vaccinante correspond à 20 microgrammes d'antigène HBs et a un volume de 0,5 millilitre (VOIR) Formule du vaccin Genhevac B Pasteur
Le vaccin doit être agité avant l'emploi afin de le mettre en suspension, ne doit pas être congelé, doit être conservé au réfrigérateur (+2°C à +8 °C) et doit être injecté par voie intra musculaire sauf contre-indications dans le deltoïde ou la région quadricipitale haute chez l'enfant jusqu'à 2 ans.
